PCR-diagnostiikan käyttäminen

Share Tweet Pin it

Polymeraasiketjureaktiota (PCR) molekyylibiologiassa kutsutaan kokeellisen menetelmän viruksen havaitsemiseksi. Sen avulla voidaan merkittävästi lisätä tiettyjen nukleiinihappojen (DNA) pitoisuuksia biologisissa näytteissä, mikä mahdollistaa niiden tunnistamisen ja tunnistamisen.

Analyysi suoritetaan seuraavasti. Geneettinen aine (verinäyte), joka voi mahdollisesti sisältää haluttua geeniä, viedään koeputkeen. Siellä sijoitetaan myös alukkeet - kemiallisesti syntetisoidaan halutun geenin pienet pituudet.

Myös DNA- tai RNA-polymeraasi lisätään astiaan, se kykenee rakentamaan nukleiinihappoketju, joka on täysin identtinen alkuperäisen kanssa. Tulokseksi saatuun koostumukseen lisätään myös neljä vapaata nukleotidia, RNA: lle tai DNA: lle erityinen rakennusmateriaali, joista yksi sisältää fosforin radioaktiivisia partikkeleita.

Tuloksena oleva seos kuumennetaan 95 - 96 ° C: een, minkä takia kaksi tavanomaisessa tilassa yhteenlaskettua DNA-heliksia hajotetaan. Sitten valmiste jäähdytetään, tällä hetkellä alukkeet kiinnittyvät viruksen genomin haluttuun alueeseen antamatta RNA: ta (tai DNA: ta) muodostamaan kaksoishelix uudelleen.

Jäähdytyksen aikana polymeraasi hakee vapaata nukleotidiketjua. Tämän entsyymin toimivuuden kannalta tarvitaan yksi ainoa nukleotidiketju. Koska polymeraasi liukuu pitkin DNA-juostea (kuten rengas köydessä), se ei voi toimia kaksinkertaisella kierteellä.

Tämän jälkeen suoritetaan toistuva lämmitysjakso, jonka takia nukleotidiketjut erotetaan toisistaan. Jokaiselle näistä PCR-sykleistä näytteessä halutun hepatiittigeenin määrä kasvaa geometrisessa etenemisessä ja loput geneettisestä materiaalista muodostetaan lineaarisesti.

Sen jälkeen, kun nukleotidijäännösten liuos on puhdistettu ja DNA-juosteet erotettu molekyylipainoparametrilla elektroforeesista, on helppo määrittää, onko haluttu geeni olemassa testattaessa tai ei.

PCR: n edut

PCR-menetelmää käyttävä laboratoriotutkimus antaa mahdollisuuden saada enemmän tietoa kuin pelkkä RNA-viruksen läsnäolo. Radioaktiivisen säteilyn parametrin määrittämisessä on mahdollista määrittää, mikä määrä geneettistä materiaalia oli alun perin tutkittavalle näytteelle. Jos kyseessä on hepatiitti, määritä viruskuormitustaso.

Tämän menetelmän toinen etu on CR-reaktion hyvin suuri herkkyys. Se on paljon korkeampi kuin klassiset menetelmät virusten havaitsemiseksi. Ihanteellisesti, halutun geenin tunnistamiseksi, vain yksi näytteessä oleva virus on riittävä PCR: lle.

Lisäksi PCR on täysin spesifinen. Sen alukkeet on luotu siten, että ne vastaavat täysin haluttujen geenien ainutlaatuisia osia, joita mikään muu sekvenssi ei ole. Molemmat sormenjäljet ​​ovat ainutlaatuisia, ja jokaisessa geenissä on ainutlaatuisia nukleotidisekvenssejä.

Laadullinen PCR-analyysi

Laadullinen analyysi paljastaa vain viruksen läsnäolon veressä. Tämä testi olisi tehtävä kaikille potilaille, joilla on todettu olevan hepatiitti C: n vasta-aineita veressään. Tulos voi olla vain yksi kahdesta arvosta: "havaittu" tai "ei havaittu". Terveessä ihmisessä normaalia (viitearvoa) ei pitäisi "havaita".

Myös kvalitatiivisen tutkimuksen tuloksista on erityinen tulkinta:

  • Tulos on "löydetty". Tämä tarkoittaa sitä, että biologisen aineen näytteen ottanut havaittiin RNA-fragmentti, joka on spesifinen hepatiitti C -viruksen Näin ollen, on se, että potilaan hepatiitti B-viruksen infektion C. Jos tulos laadullinen PCR "löysi", se osoittaa, että virus toistojen ja tällä hetkellä se tarttuu uusiin maksasoluihin kehossa.
  • Tulos on "ei havaittu". Sellainen päätös osoittaa, että näytteessä saatua biologista materiaalia RNA-fragmenttia ei havaittu laboratoriossa, joka on spesifinen joko HCV-RNA sama pitoisuus patogeeni-infektion näyte oli alle raja testin herkkyys.

Hepatiitti C -virus-RNA: n akuutissa vaiheessa kvalitatiiviset tutkimukset, joissa PCR-tekniikkaa käytetään, voivat paljastua 1-2 viikon kuluttua kehon infektoitumisen jälkeen, toisin sanoen paljon ennen hepatiitti-vasta-aineiden esiintymistä.

Tällaisen tutkimuksen analyyseistä voi olla epäluotettavia tuloksia:

  • saastunut biomateriaali;
  • hepariinin läsnäolo potilaan veressä;
  • läsnäolo kemiallisissa tai proteiini-aineissa (inhibiittoreissa), jotka vaikuttavat PCR: n eri komponentteihin.

PCR: n kvalitatiiviseen analyysiin ei tarvita potilaan erityistä valmistelua tutkimusta varten. Laskimoveria käytetään materiaalina.

Tulosten arviointi

Laadullisilla PCR-testeillä on tietty herkkyys, ja tutkimuksen ja laitteiston tason mukaan laboratoriossa voi vaihdella 10-500 IU / ml.

Tämä tarkoittaa sitä, että jos verinäytteessä oleva virus on hyvin pienellä pitoisuudella (pienempi kuin tietyn laboratorion herkkyysraja), potilaspotilaat voidaan määrittää "ei havaittu". Tämän vuoksi, toteutettaessa kvalitatiivinen analyysi PCR alhainen viremian (virus pieni pitoisuus), esimerkiksi potilailla, jotka saavat hoitoa antiviraalisen hoidon, on tärkeää tietää, ja kynnys herkkyyden diagnostinen järjestelmä.

Diagnostiikkajärjestelmien variantit

Virologisen vasteen kontrolloimiseksi antiviraalista hoitoa suositellaan käyttämään diagnostisia järjestelmiä, joiden herkkyysraja on vähintään 50 IU / ml. Nämä kriteerit täyttyvät, esimerkiksi: analysaattorit Cobas Ampicolor HCV-testi (c tarkkuus on 50 IU / ml) ja RealBest HCV-RNA (herkkyydellä 15 IU / ml).

WHO: n mukaan suosituksia annetun lopullisen diagnoosin hepatiitti C, sen tulee perustua yksinomaan triple tehtyjen RNA-viruksen seeruminäytteitä potilaasta, jolla ei ole muita hepatiitti merkki lajeja.

PCR-menetelmien lisäksi käytetään myös TMA-tutkimusta (transkriptionaalisen monistumismenetelmän) HCV-RNA: n havaitsemiseksi potilailla. Se on paras herkkyysraja (5 - 10 IU / ml), mutta maassamme tämä testausmenetelmä ei ole vielä kovin yleinen.

Virusten havaitut muunnokset

Tämä kvalitatiivinen määritys hepatiitti C -viruksen RNA: n seerumissa mahdollistaa tämän viruksen useiden genotyyppien määrittämisen. Tällä hetkellä tiede tietää tämän viruksen yli kuusi genotyyppiä sekä noin 10 alatyypin taudista.

Maassamme on yleisiä 1, 2, 3 genotyypin viruksia. Laboratoriot voivat tunnistaa seuraavat genotyypit: 1a ja 1b, 2a, 2b ja 2c ja 3, 4, 5a ja 6, alatyypeistä riippumatta. Kaikille virusmuutoksille havaitsemisen spesifisyys on 100%.

PCR: n kvantitatiivinen analyysi

Kvantitatiivisen PCR-testin avulla määritetään hepatiittiviruksen taso verinäytteissä (viruskuorma). Tämä viremian (viruksen pitoisuus) testin avulla voit määrittää tietyn geneettisen materiaalin (viruksellisen RNA: n) yksiköiden lukumäärän, joka havaitaan tietyssä määrin. Tässä tapauksessa määritä sen pitoisuus 1 ml: ssa, mikä vastaa 1 um. cm.

Analyysin kvantitatiiviset parametrit ilmaistaan ​​lukuina, joita käytetään yksikköinä mittausyksikköinä yksikköinä (IU) millilitraa kohti (ml), ilmaistuna ME / ml. Joissakin laboratoriossa viruksen määrä voidaan määrittää muilla yksiköillä: kopioiden määrä millilitraa kohden on merkitty kopioksi / ml.

  • Aikataulu: C-hepatiittiä varten PCR: n tällainen kvantitatiivinen analyysi suoritetaan juuri ennen hoidon aloittamista. Sitten 1., 4., 12. ja 24. viikolla. Arviointi 12. viikolla on suuntaa antava, sen avulla voidaan määrittää hoidon tehokkuus.
  • Valmistelu analyysiin. PCR: n kvantitatiivista analyysiä varten potilaan erityistä valmistetta tutkimusta varten ei tarvita. Puoli tuntia ennen näytteenottoa, et saa tupakoida. Laskimoverta käytetään laboratoriomateriaalina.

Tulosten arviointi

Eri laboratorion testausjärjestelmissä tämän indikaattorin vaihteluvälit ovat IU / ml. Keskimäärin käytetään konversioparametria, jossa 4 kopiota / ml = 1 IU / ml. Tämä tarkoittaa sitä, että jos laboratorio antaa PCR-analyysin tuloksen 2,4 * 10 6 kopiota / ml, niin tämä parametri tulee jakaa 4: llä ja saamme 6 * 10 5 IU / ml.

Suurta kuormitustasoa 800 000 IU / ml pidetään suurena, mikä vastaa suunnilleen 3 000 000 kopiota / ml. Joidenkin kirjoittajien mukaan matala viremia vastaa kvantitatiivisen PCR: n parametreja alle 400 000 IU / ml.

Kvantitatiivisen testin tuloksena lopulliset tulokset voidaan toimittaa ei digitaalisen arvon muodossa, vaan "mittausalueen alapuolella" tai "ei havaittu".

  • Arviointi: "mittausalueen alapuolella". Tämä osoittaa, että kvantitatiivinen testi ei onnistunut havaitsemaan hepatiitti C -virus-RNA: ta, mutta itse virus on läsnä kehossa hyvin pienissä pitoisuuksissa. Tämä on osoitettu ylimääräisellä kvalitatiivisella testillä, joka vahvistaa viruksen läsnäolon.
  • Arviointi: "ei havaittu". Tämä tulos osoittaa, että kvantitatiivisella testillä ei havaittu virusta RNA-näytteessä.

Vektorin kuormituksen parametri määrittää ensinnäkin sairauden infektiivisyyden asteen, potilaan "infektiivisyyden". Mitä korkeampi potilaan pitoisuus viruksessa, sitä todennäköisempää on siirtää se muille ihmisille. Esimerkiksi, kun harrastat seksiä sairastuneella henkilöllä tai pystysuoralla polulla. Tällainen kvantitatiivinen indikaattori auttaa myös määrittämään potilaan hoidon tehokkuuden.

PCC: n kvantitatiivinen analyysi on tärkeä antiviraalisen hoidon kannalta, sen onnistumisen arvioimiseksi ja kurssin keston ajaksi. Joten, kun kehon nopea vaste hoitoon ja vähäinen viremia, hoidon kestoa voidaan vähentää.

Koska kvantitatiivisen PCR-parametrin hidas lasku, antiviraalista hoitoa on laajennettava tai muunnettava. Jos viruksen kuormituksen taso on alhainen, tämä on edullinen hoidon tekijä, jos se on korkea, silloin sovellettu hoitomenetelmä on tehoton ja lääkkeitä tai niiden käyttötapoja on muutettava.

№ 321СВ, virus hepatiitti С, määritelmä RNA кач. (Kvalitatiivinen HCV-RNA) seerumissa

HCV-RNA: n määritys seerumissa polymeraasiketjureaktiolla (PCR) reaaliaikaisella havaitsemisella.

Detektoitava fragmentti on hepatiitti C -viruksen RNA: n spesifinen alue. Tunnistettavat genotyypit: 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4, 5a, 6 riippumatta alatyypistä. Määrityksen spesifisyys on 100%. Määrityksen herkkyys on 60 IU / ml.

  • Kliiniset hepatiittiarvot.
  • Ennalta ehkäisevät seulontatutkimukset (hepatiitti C -viruksen RNA - akuutin infektion varhaisin merkki).
  • Yhteyshenkilöiden kyselyt.
  • Hepatiitti-etiologian diagnosointi - johtavan viruksen tunnistaminen.
  • Viruksen aktiivisen replikaation vaiheen tunnistaminen kroonisessa kunnossa.
  • Hoidon tehokkuuden valvonta.
  • Maksakirroosi.

Tutkimustulosten tulkinta sisältää tietoa hoitavalle lääkärille ja ei ole diagnoosi. Tämän osan tietoja ei voida käyttää itsediagnoosiin ja itsekäsittelyyn. Lääkäri tekee tarkan diagnoosin käyttäen sekä tämän tutkimuksen tuloksia että muista lähteistä saatuja tietoja: anamneesi, muiden tutkimusten tulokset jne.

Diagnoosi hepatiitti C: n PCR: n kanssa

Kaikki eivät tiedä, mihin käytetään hepatiitti C: n PCR-diagnoosimenetelmää. Yksi yleisimmistä taudinryhmistä on ruoansulatuskanavan infektiotauti. Useimmiten on mahahaava (haavaumat), suolet (koliitti, suolitulehdus) ja maksa (hepatiitti).

Kaikilla edellä mainituilla elimillä maksan maksimessa on suurin taakka. Kehossa maksan merkitys on erittäin tärkeä:

  1. Melkein kaikki metaboliset reaktiot esiintyvät maksassa (tässä kaikki elimet, jotka mahdollistavat kehon toimivan täydellisesti) muodostuvat.
  2. Maksa on tärkein elin, joka suorittaa detoksifikaatiotoiminnon. Sen avulla (erityisesti sapen kautta) poistetaan monet substraatit, jotka voivat aiheuttaa myrkytyksen ja aiheuttaa vakavia seurauksia.

Valitettavasti monet ihmiset eivät noudata terveyttään, koska maksa alkaa kärsiä. Yleensä eri etiologian hepatiitti kehittyy (virus, myrkyllinen).

Määritelmä hepatiitti

Virustaudin hepatiitti on tärkeä paikka maksasairauksien joukossa. Taudin kulku, hoidon monimutkaisuus, tekevät ne ensimmäiseksi tämän elimen toisen luonteen patologioista.

Kaikki hepatiitti on jaettu akuutteihin ja kroonisiin. Akuutti kuljettaa hepatiitti A: n ja B: n. Ensimmäisessä paikassa krooninen on hepatiitti C.

Tämä tauti johtuu hepatiitti C -viruksesta. Ominaispiirre on se, että tauti voi kestää pitkään ilman kliinisiä ilmenemismuotoja.

Se välitetään pääasiassa veren kautta. Verenkierrosta virusta tulee maksaan, jossa se alkaa lisääntyä soluissaan. Virion kertymisen seurauksena tartunnan saaneessa hepatosyytissä tapahtuu tuhoa. Vastauksena vasta-aineet, jotka alkavat hyökätä hepatosyyttien jäännöksille, alkavat tuottaa. Tästä johtuen maksasoluihin kohdistuu poolia, joka pahentaa taudin kulkua.

Koska tauti on oireeton tai oireeton ja kliiniset merkit ilmenevät vain merkittävillä solujen vahingoksi, tämä sairaus edellyttää diagnostisten menetelmien luomista sen läsnäolon tunnistamiseksi ja tarvittavien toimenpiteiden toteuttamiseksi.

Hepatiitti C: n diagnosointi: laadulliset ja kvantitatiiviset analyysit

Tällä hetkellä hepatiitti C: n diagnoosiin käytetään hepatibiopsian, immunografiikan menetelmiä.

Ne mahdollistavat suoraan läsnäolon määrittämiseksi tartunnan hepatosyyttien (tutkimus maksabiopsia) tai spesifisiä vasta-aineita infektoituneiden solujen (immunogrammi). On kuitenkin olemassa menetelmä, joka pystyy luotettavasti määrittämään itse viruksen läsnäolon. Tämä PCR on polymeraasiketjureaktio.

Tämän menetelmän ydin on se, että tietyissä olosuhteissa tapahtuu RNA-ketjujen kehittyminen. Tämä johtuu siitä, että viruksen hiukkasista on osia veressä tai biopsiaan. Kun ne on yhdistetty joidenkin molekyylien kanssa väliaineessa, tapahtuu viruksen RNA: ta täydentävien ketjujen synteesi. Seuraavassa analyysissä ja vertailussa hepatiitti C -viruksen tunnetun nukleotidisekvenssin kanssa on mahdollista määrittää, onko tietyssä viruksessa kehossa ja onko maksavaurioita läsnä.

PCR suoritetaan sen jälkeen, kun spesifiset vasta-aineet havaittiin hepatiittivirusta vastaan ​​veressä. Testin jälkeen tulokseksi saadaan - RNA "havaittu" tai "ei havaittu". Toisinaan hän voi sanoa "tarpeeksi materiaalia" - tässä tapauksessa hepatiitti C: n toistuvaan analyysiin.

Jos määrä viruspartikkelien on pienempi kuin vaadittu minimi määrä, voimme puhua siitä, että hepatiitti B ei ole läsnä, ja vähimmäismäärä geneettistä materiaalia voidaan "sekoittaa", koska jäljittelyä geneettisen materiaalin, tai jotkut nukleotidien sekvenssit, jotka sattumalta voi samaan aikaan, että viruksen.

  1. PCR-negatiivisia tuloksia voi ilmetä, kun itse asiassa on viruspartikkeleita veressä, mutta ne ovat niin pieniä (infektio tapahtunut äskettäin tai analyysi edelsi pitkä ja intensiivinen antiviraalinen hoito), että testijärjestelmä yksinkertaisesti ei voi kunnolla määrittää niiden pitoisuus. RNA - "ei havaittu".
  2. Jos PCR: llä on positiivinen tulos, veressä on niin paljon viruspartikkeleita, että niiden määrä ylittää testijärjestelmän herkkyyden alemman kynnyksen. Tässä tapauksessa infektioprosessin kehittymisriski on suuri (tai se on jo melko laiminlyöty vaiheessa). Yleensä suuri määrä virusta on jo osoitus hoidosta ja myöhemmästä maksansiirrosta.

Joskus testissä voi tulla vääriä positiivisia tai vääriä negatiivisia.

Hepatiitti-PCR: n vääriä negatiivisia tuloksia havaitaan, kun reaktioväliaineessa on joitain ainesosia, jotka inhiboivat viruskappaleiden kopioiden muodostumista. Tämän vuoksi, et voi saada todellista kuvaa tilan verta, joka auttaa kulkevat viruksen ja taudin etenemistä. Reaktioon voi vaikuttaa hepariinin läsnäolo veressä (johtuen veren suhteellisen viskositeetin vähenemisestä). Analyysin virheellinen tulkinta on myös mahdollista, kun testiaineen kuljetusta ja varastointia koskevat ehdot eivät ole täyttyneet.

Vääriä positiivisia tuloksia, kun hepatiitti C: tä diagnosoidaan, PCR annetaan useimmiten silloin, kun koeputki tai työväline on saastunut. Lisäksi, positiiviset tulokset voidaan havaita, että läsnä hepatiittivirusten ja muiden ryhmien (johtuen rajat reaktio).

PCR: n laadullinen analyysi hepatiitti C: n toteamiseksi

Suuri määrä kryoglobuliineja esiintyy veressä myös suoraan PCR: n käyttäytymiseen. Tämän vuoksi ennen testausta hepatiitti C on määrittää niiden pitoisuus veressä havaitsemiseksi saadun tuloksen vääristymiseen etukäteen ja estää sen.

Määriteltyjen testien suorittamisen jälkeen on selvää, onko veriviruspartikkeleita. Kun ne on määritelty, on suositeltavaa aloittaa välittömästi antiviraalinen hoito prosessin hidastumisen hidastamiseksi. Toisin kuin hepatiitti B, hepatiitti C: lle ei ole täydellistä parannuskeinoa; tauti siirtyy vain piilevään vaiheeseen ja alkaa virrata hitaammin. Maksan tappio on väistämätöntä. Prosessin viimeisessä vaiheessa, jolloin maksa ei enää kykene selviytymään toiminnastaan, saattaa olla tarpeen siirtää.

Hoito toteutetaan pääasiassa kahdella lääkkeellä - interferoni ja ribaviriini.

Niiden tehokkuus hepatosyyttien vaurioitumisprosessin hidastamisessa on todistettu. Sillä välin on välttämätöntä antaa infuusiohoitoa maksan toiminnan helpottamiseksi.

Kaikki potilaat, jotka ovat nähneet viruspartikkeleiden määrän kasvun veressä, ovat väistämättä hepatiologin tilillä. Useita kertoja vuodessa on suositeltavaa suorittaa ennaltaehkäisevä tutkimus prosessin etenemisen määrittämiseksi ja elinsiirtoa koskevien merkintöjen oikea-aikainen havaitsemiseksi. Lisäksi voit käyttää ja hepatoprotectoreja, vaikka lääkärien mielipiteet ovat jonkin verran erilaiset. Jotkut uskovat, että nämä lääkkeet voivat pysäyttää prosessin ja suojata heittämättömät hepatosyytit; Toiset ovat vakuuttuneita siitä, että niitä ei ole järkevää käyttää ja että intensiivinen antiviraalinen hoito on suoritettava.

Näin ollen hepatiitti C kuuluu sairauksien luokkaan, jonka toteaminen aiheuttaa joitain vaikeuksia. Diagnoosimenetelmien parantaminen sekä ajankohtaiset ennaltaehkäisevät tutkimukset vähentävät tämän taudin esiintymistä. On myös tärkeää ehkäistä tämä tauti. Sinun tulee varovasti välttää kosketusta veren kanssa, kieltäytyä ottamasta huumeita, vasta tämän taudin hävittäminen. Tärkeintä ennaltaehkäisyssä ja hoidossa on potilaan tietoinen asenne hänen terveyteensä.

Hepatiitin PCR-analyysi

PCR ON HEPATITIS C

  1. Hepatiitti C: n RNA ( "PCR-laatu") - havaitseminen on verestä on osoitus akuutti tai krooninen hepatiitti C määritetään 2. viikolla tartunnan, tulee ennen anti-HCV-, jonka avulla on mahdollista diagnosoida sairauden alkuvaiheessa. RNA: n määritys suoritetaan henkilöillä, joilla on akuutti hepatiitti ja joilla on positiiviset hepatiittianalyysitulokset.
  2. Hepatiitti C: n RNA ("PCR-kvantitatiivinen") - viruskuorma - yksi indikaattoreista antiviraalisen hoidon tehokkuudesta ja sen arvioinnista (muuttamalla tasoa alkuperäisestä arvosta). Hepatiitti C: n RNA: n sisällön kvantitatiivinen karakterisointi on tärkeä antiviraalisen hoidon tehokkuuden arvioimiseksi ja on ennustava merkitys kroonisuuden määrittämisessä. Potilaat, joilla on korkea viruskuorma (suuret RNA-määrät) ennen hoitoa, vastaavat hoidosta huonommin.
  3. C-hepatiitin RNA (genotyypit 1, 2, 3) - Hoidon laatu riippuu tyypistä ja sen tehokkuudesta. Genotyypin 1 viruksen aiheuttama tauti on eniten epäsuotuisa suhteessa terapeuttisen tehokkuuden ennusteeseen. Nykyisten suositusten mukaan hepatiitti C: n genotyyppien veritesti on tehtävä ennen antiviraalisen hoidon aloittamista.
  4. Hepatiitti C: n RNA (laajennettu genotyyppaus 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5, 6) - Venäjän alueella kiertävät 1a, 1b, 2a, 2c, 2k, 3a-alatyyppejä. Hepatiitti C, joka aiheutuu genotyyppien 1 ja 4 viruksesta, on eniten epäsuotuisa suhteessa ennusteeseen.
  5. Hepatiitti C: n ultraääniherkkä PCR (kvalitatiivinen menetelmä) - analyysia käytetään taudin diagnosointiin infektion alkuvaiheessa, on optimaalinen veren luovutuksen testaamiseksi ja antiviraalisen hoidon vasteen arvioimiseksi. Tätä tutkimusta suositellaan myös hepatiitti C -viruksen vasta-aineiden puuttuessa potilaille, joilla on määrittelemätön syy sairastua maksasairautta, hankittu immuunipuutos tai immunosuppressiivinen hoito.
  6. Hepatiitti C: n ultraääniherkkä PCR (kvantitatiivinen menetelmä) - ainutlaatuinen analyysi, jolla on suuri herkkyys (10 IU / ml) hepatiitti C -virus-RNA: n määrittämiseksi kvantitatiivisesti. Tutkimusta käytetään hoidon tehokkuuden seurantaan.

PCR ON HEPATITIS B

  1. Hepatiitti B -DNA (kvalitatiivinen analyysi) - hepatiitti B -viruksen lisääntymisindeksi. Näyttää veressä ensin keskimäärin yhden kuukauden infektion jälkeen. Joissakin tapauksissa se on ainoa piilevän HBV-infektion merkki. Viruksen DNA: n määrittäminen mahdollistaa mutanttikantojen aiheuttaman hepatiitti B: n diagnosoinnin, jossa muita infektiomerkkejä ei havaita.
  2. Hepatiitti B-DNA (kvantitatiivinen analyysi) - DNA-pitoisuus (viruskuorma) on yksi kokeista, joita käytetään kroonisen hepatiitti B: n vaiheen määrittämiseen ja antiviraalisen hoidon tehokkuuteen. Analyysi suoritetaan ennen hoitoa ja sen aikana.
  3. B-hepatiitin genotyyppaus - viruksen eri genotyyppien aiheuttamat sairaudet voivat erota kliinisessä kurssissa ja lopputuloksessa. Hepatiitti B, joka aiheutuu genotyypin C viruksesta, kestää usein kroonisen kurssin ja sillä on suuri riski muuttaa maksakirroosiin tai maksasyöpäkarsinoon. A-viruksen tartunnan saaneet potilaat vastaavat paremmin hoitoon.
  4. Hepatiitti B: n ultraääniherkkä DNA-PCR (kvalitatiivinen menetelmä) - luovuttaa heidät taudin varhaiseen havaitsemiseen. Hyvin informatiivinen luovuttajan veren tutkimuksessa. Voidaan käyttää varmistamaan spontaani tai hoidon aiheuttaman viruksen poistaminen ihmiskehosta.
  5. Hepatiitti C: n ultraääniherkkä PCR (kvantitatiivinen menetelmä) - hepatiitti B -viruksen diagnoosi kvantitatiivisesti. Analyysi hoidetaan hoidon tehokkuuden arvioimiseksi.
  6. Antiviraalisten lääkkeiden resistenssin mutaatioiden määrittäminen lamivudiini, telbivudiini, entekaviiri, adefoviiri, tenofoviiri (annetaan yhdessä hepatiitti B: n kvantitatiivisen DNA: n analyysin kanssa). Analyysin läpäisemiseksi tarvitaan kroonista B-hepatiittia sairastavat potilaat ennen antiviraalisen hoidon aloittamista ja lääkkeiden antamisen aikana. Tuloksena on tietoja hepatiitti B -viruksen vastustuskyvyn saatavuudesta viruslääkkeille:
    • R - virus on resistentti antiviraaliselle lääkkeelle (tämän lääkkeen vastustus mutaatiot on havaittu);
    • S - hepatiitti B -virus on herkkä lääkkeelle (noraaliarvo, resistenssin mutaatiota ei havaita);
    • I - tartunnan aiheuttaja voi aiheuttaa resistenssin tätä lääkettä vastaan.

PCR-tutkimus hepatiitti C: tyypit, indikaatiot, transkripti

Viruslääke C on vakava sairaus, joka esiintyy maksavaurion kanssa. 80 prosentissa potilaista se kulkeutuu krooniseen muotoon. Virus kertoo maksasoluissa - hepatosyytteistä - ja aiheuttaa niiden kuoleman. Kuollut kudos on korvattu sidekudoksen fociin, fibroosi kehittyy.

Kehittämisen kanssa maksafibroosin ei kykene suorittamaan toimintonsa, alkaa maksakirroosi, joka on vaarallinen sen komplikaatioita: kasvava paine porttilaskimon, ruoansulatuskanavan verenvuoto, veren hyytymisen heikentymistä mielialan muutokset johtuvat vahingoittaa aivoja ytimien myrkyllisiä aineita.

Taudin syy on infektio virus Flaviviridae-perheestä, joka on RNA-viruksen tyyppi. Tämä tarkoittaa sitä, että geneettinen materiaali, jolla taudinaiheuttajan proteiinit syntetisoidaan, koodataan ribonukleiinihapon molekyylissä. Infektio tapahtuu veren kautta, seksuaalisesti, ja raskaana olevasta naisesta sikiöön. Valitettavasti vasta-aineiden ja vasta-aineiden tuotannon alkamisen välillä voi kulua varsin suuri aika - kahdesta viikosta kuuteen kuukauteen. Tämä ei salli infektion määrittämistä entsyymi-immunoanalyysimenetelmällä ja aloittaa hoidon alkuvaiheessa.

Mikä on PCR-analyysi?

PCR on molekyylianalyysimenetelmä, joka mahdollistaa patogeenin geneettisen materiaalin havaitsemisen jo ensimmäisellä viikolla infektion jälkeen käyttäen polymeraasiketjureaktiota. Tutkimuksella on suuri spesifisyys, tarkkuus ja se mahdollistaa viruksen läsnäolon tai poissaolon määrittämisen, mutta myös sen pitoisuuden ja genotyypin.

Tutkimuksessa otetaan potilaan veri, jossa viruksen RNA: ta löytyy. Veri lisätään alukkeet - syntetisoida keinotekoisesti lyhyt pituus osia halutun geenin, ja RNA-polymeraasi - erityinen entsyymi, joka kertoo määrä geneettisen materiaalin patogeenin. Erikoislaitteiston avulla suoritetaan useita lämmitys- ja jäähdytysjaksoja. Materiaali analysoidaan sitten ja verrataan tunnettujen geenien viruksen pohjalta, joiden johtopäätös läsnä ollessa tai ilman tartuntaa.

Hepatiitti C: n PCR-analyysityypit

PCR-analyysissä on kolme tyyppiä:

  1. Laadullinen PCR-analyysi. Tutkimuksen ensimmäinen vaihe. Sen avulla voit tunnistaa viruksen geneettisen aineen veressä.

  • PCR: n kvantitatiivinen analyysi. Sen avulla voidaan määrittää viruskuorma - patogeenin geneettisen aineen pitoisuus yhden millilitran veressä. Tämä tutkimus suoritetaan ennen hoidon aloittamista ja sen jälkeen ensimmäisellä, neljäs, kahdestoistaosalla ja (jos kurssi on pitkä) kahdenkymmenenneljännen hoitoviikon tehokkuuden arvioimiseksi.

  • genotyypitys. Hepatiitti C: n aiheuttaja usein ja nopeasti mutatoi. Planeetalla havaittiin tämän viruksen genotyypin seitsemän varianttia. Venäjällä ensimmäinen, toinen ja kolmas tyyppi ovat yleisiä. Jokaisella genotyypillä on erilainen vastustuskyky hoidolle, esimerkiksi ensimmäisen tyypin hoidon tehokkuus on kuusikymmentä prosenttia ja toisen ja kolmannen osalta se saavuttaa kahdeksankymmentäviisi. Siksi, jotta voidaan valita sopivia lääkkeitä ja määrätä hoidon riittävän pitkä, on välttämätöntä määrittää tarkalleen minkä tyyppinen virus potilas on saanut tartunnan.
  • Indikaatiot hepatiitti C: n PCR-analyysille

    PCR-tutkimus on määrätty seuraavissa tapauksissa:

    • yhteydenpito sairauteen, joka voi johtaa infektioon;
    • positiivinen entsyymi-sitoutunut immunoanalyysi;
    • maksakirroosin merkit: muutokset maksan koossa, laajentunut perna, ihonalaisen laskimoplexuksen esiintyminen vatsaan;
    • maksavaurion oireiden ilmaantuminen: kipu vatsan oikealla puolella, ihon keltaisuus;
    • lisääntynyt ALT- ja AST-aktiivisuus biokemiallisessa verianalyysissä;
    • ennen hoidon aloittamista viruskuorman määrittämiseksi;
    • valvomaan antiviraalisen hoidon tehokkuutta;
    • hoidon päättymisen jälkeen relapsin seurantaan;
    • diagnosoidun hepatiitti B: n läsnä ollessa, jotta sekoitettaisiin maksan aiheuttamia maksavaurioita.

    PCR-tutkimuksen dekoodaus hepatiitti C: lle

    Hepatiitti C: n PCR-analyysin ja entsyymi-immunoanalyysin dekoodauksen tulee olla hepatiologin tai tartuntatautien erikoislääkäri. Analysoidaan PCR: n tulokset on tarpeen yhdistettynä biokemialliseen verikokeeseen, biopsiaan ja ultraäänitutkimukseen. Ainoastaan ​​pätevä lääkäri kykenee analysoimaan tutkimustuloksia ja määrittämään ne oikean hoidon perusteella.

    Laadullisen analyysin dekoodaus.

    Taudinaiheuttajan geneettinen materiaali löydettiin analysoidusta biologisesta materiaalista. Infektio on vahvistettu.

    Infektiota ei ole, tai patogeenin RNA-määrä on herkkyysrajan alapuolella.

    Kvantitatiivisen analyysin dekoodaus.

    Normaali luku terveille ihmisille. Se tarkoittaa, että testiaineessa ei ole hepatiitti C -RNA: ta tai sen pitoisuus on alle tutkimuksen herkkyyskynnys.

    RNA: n konsentraatio on alhaisempi kuin kvantitointialue. Tällaisia ​​tuloksia tulkitaan erittäin varovasti, korreloituvat muiden tutkimusten tietojen kanssa ja suorittavat usein toisen tutkimuksen.

    Virustason tasoa tietyllä pitoisuudella pidetään alhaisena. Yleensä viruksen määrän väheneminen tarkoittaa, että hoito onnistuu.

    Yli 8 x 10 ^ 5 IU / ml

    Virustason tasoa tietyllä pitoisuudella pidetään korkeana.

    Enemmän kuin 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    RNA: n määrä ylittää kvantitointialueen ylärajan. Johtopäätökset viruskuorman asteesta tämän tuloksen kanssa ovat mahdottomia. Yleensä tällaisissa tapauksissa testi toistetaan verinäytteen laimennuksella.

    Genotyyppien dekoodaus.

    Erityisen genotyypin RNA havaittiin

    Biomateriaalissa hepatiitti C -virus havaitaan spesifisestä genotyypistä ja alatyypistä. Tulos on koodattu latinalaisin numeroina ja latinalaisin kirjaimin, esimerkiksi - 1a, 2b. Seitsemän genotyyppiä ja kuusikymmentäseitsemän alatyyppiä on olemassa, mutta Venäjällä on vain kolme ensimmäistä tyyppiä.

    Hepatiitti C -virus-RNA havaittiin

    Veressä RNA: sta löytyy harvinainen genotyyppi Venäjälle, jota ei voida katsoa johtuvan ensimmäisestä, toisesta tai kolmannesta tyypistä. Lisää tutkimusta tarvitaan.

    Tämä tulos osoittaa, että potilas on terveellinen tai että taudinaiheuttajan RNA-taso on liian pieni.

    Tilanne on mahdollista, kun hepatiitti C: n PCR-analyysi on negatiivinen ja entsyymin immuunimääritys havaitsee vasta-aineita virusta vastaan. Tämä tarkoittaa, että potilaalla on ollut hepatiitti C akuutissa muodossa ja parantunut. Noin kaksikymmentä infektion tapausta johtaa spontaaniin hoitoon, jos potilaan keho on riittävän vastustuskykyinen infektioon.

    Huolimatta siitä, että PCR on erittäin tarkka analyysi, sen tulokset voivat vääristyä seuraavissa tilanteissa:

    • veri kuljetettiin laboratorioon riittämättömissä olosuhteissa, lämpötilajärjestelyä loukattiin;
    • biomateriaalin näyte oli saastunut;
    • veressä oli jäljellä olevia jälkiä hepariinia ja muita antikoagulantteja;
    • Tutkittuna aineena olivat inhibiittorit - aineet, jotka hidastavat tai pysäyttävät polymeraasiketjureaktion.

    PCR: n edut muihin menetelmiin verrattuna

    1. Diagnoosi varhaisvaiheessa. PCR havaitsee taudin aiheuttavan aineen geneettisen materiaalin. Immunogluoresenssanalyysin avulla on mahdollista määrittää vain immunoglobuliinit - aineet, joita keho tuottaa vastauksena infektioon. C-hepatiitti-infektion tapauksessa tartunnan ja immuunivasteen puhkeamisen välinen aika voi olla useita viikkoja ja kuukausia, jolloin ELISA ei ole tehokas. PCR antaa vastauksen jo ensimmäisellä viikolla tartunnan jälkeen.

  • Pieni virheen todennäköisyys. Tutkituissa aineissa määritetään geneettinen materiaali, joka on tyypillistä vain yhdelle tyypille taudinaiheuttajia. Näin voit sulkea pois vääriä tuloksia. ELISA: n avulla virheet ovat mahdollisia, koska samanlaisia ​​vasta-aineita voidaan vapauttaa erilaisista viruksista - tällaisia ​​vasta-aineita kutsutaan ristireaktiiviseksi.

  • Korkea herkkyys. PCR voi havaita patogeenin RNA jopa pieninä määrinä. Tämä mahdollistaa piilevien infektioiden tunnistamisen.
  • Miten valmistaudutaan verensiirtoon PCR-tutkimuksessa

    PCR-analyysille laskimon verta kerätään hepatiitti C: lle. Yleensä kaksi verin osaa otetaan potilaan laskimoon kerralla: ensimmäinen lähetetään PCR: lle ja toinen ELISA: lle. Tämä tehdään, jotta voidaan tarkemmin arvioida, kuinka huonosti potilas on tartunnan saaneessa viruksessa, ja miten häiriönsieto taistelee sitä vastaan.

    Yleensä potilaalle vaaditaan seuraavia sääntöjä:

    • verikoe otetaan aamulla;
    • viimeisen aterian ja veren luovutuksen välisen tauon on oltava kahdeksan kymmeneen tuntiin;
    • kaksi tai kolme päivää ennen analyysia sinun on annettava paistettuja ja rasvaisia ​​ruokia ja alkoholia;
    • 24 tuntia ennen analyysia potilaan tulee välttää fyysistä rasitusta: älä kantaa painoja, älä käy kuntosalilla tai altaalla.

    PCR-analyysin dekoodaus hepatiitti C: lle

    Erityinen laboratoriotutkimus - hepatiitti C ptsr -analyysi - merkittävästi yksinkertaistaa tämän virustaudin diagnoosia. Poikkeus ei ole ja hepatiitti C. Pieni veri-näyte voidaan tarkastaa virus-aineen RNA: n ja muun geneettisen aineen sisällöstä. PCR-analyysin suorittavat kaikki henkilöt, joilla on vasta-aineita veriplasman kiertävälle hepatiitti C: lle, jonka läsnäolo vahvisti kvalitatiivisen havaitsemisen.

    Tulosten tulkinta tulkitaan tutkimuslomakkeen graafina "positiivisena" tai "negatiivisena" analyysina. Lisäksi PCR: n avulla ei ole mahdollista määrittää viruksen minimaalisen sisällön laadullisesti vaan myös laskea partikkeleiden lukumäärä. Näin ollen on mahdollista määrittää arvioitu viruskuorma ja määritellä mahdollisimman tarkasti hoidon lääketieteellinen taktiikka.

    Maksan vaurioituminen

    Maksa osana ruoansulatuskanavaa on valtava kuorma. Soluissaan tapahtuu suurin osa kaikentyyppisten aineenvaihduntatuotteiden metabolisista reaktioista, mikä takaa kaikkien elinten ja järjestelmien optimaalisen toiminnan. Samanaikaisesti sen detoxifikaatioarvo on erinomainen irrotettaessa kuonat ja aineenvaihdunta-aineet fermentaarisella sapolla.

    Maksan tappio erilaisten virusten vuoksi on äärimmäisen vaarallista elimelle. Erilaiset kliiniset kuvat ja hepatiittihoidon noudattamatta jättäminen johtavat ensimmäiseen paikkaan terveysvaarojen kannalta. Hepatiitti C on krooninen ja voi antaa negatiivisen testituloksen pitkään, henkisesti loistaen ihmiskehoa. Virus välitetään biologisten nesteiden kautta: verta ja harvemmin sperman kautta. Muun kuin steriilien ruiskujen, tarttuvien naisten luonnollisten toimitusten, vahingossa tapahtuvien vammojen tai terveydenhuollon työntekijöiden leikkausten huumausaineiden väärinkäyttö voi johtaa viruksen tarttu- miseen terveille ihmisille.

    Piilevän kliinisen kuvan ja epästemaattisen patologian estävät sairauden oikea-aikaisen diagnoosin. Myönteinen tulos voi yksinkertaisesti olla huono laadun määritys. Vain merkittävä maksasolujen vaurio aiheuttaa tietyn oireen, mutta viremian negatiivinen vaikutus siihen aikaan ei jätä mahdollisuutta palauttaa elintä.

    Nykyaikainen lääketiede on kehittänyt erityisiä menetelmiä viruksen pienimmän jäljittämisen tunnistamiseksi. PCR, ifa, maksan biopsia pystyy havaitsemaan pienimmän maksavaurion ja viruksen vastaisten vasta-aineiden vähimmäistason. PCR-analyysin avulla tapahtuva analyysi on yksinkertaisin ja luotettavampi diagnostisessa käytännössä.

    Laadullinen analyysi

    Polymeraasireaktion ydin on RNA: n sekvenssin kehittäminen. Reaktio suoritetaan, kun veriplasmassa on samat virusproteiinit.

    Erityiset katalyytit mahdollistavat samanlaisen virusketjujen sekvenssin syntetisoimisen, jota verrataan viruksen RNA: n tunnettujen nukleotidien kanssa. Tämän perusteella määritetään viruskuorma ja maksavaurio.

    PCR pystyy havaitsemaan jopa yhden halutun geenin läsnäolon veressä. Tämä diagnostinen ketjureaktio on myös hyvin spesifinen. Nukleotidiketjujen sekvenssi on ainutlaatuinen jokaiselle olennolle, niin että entsymaattiset alukkeet luovat identtiset sekvenssit halutusta geneettisestä informaatiosta. Näin ollen mikä tahansa virus voidaan havaita pienimmällä tarkkuudella, vaikka sen kvantitatiivinen indeksi on äärimmäisen pieni.

    Potilaat, joiden veressä kehitetyt viruksen hepatiitti-vasta-aineet löydettiin, suorittavat ptsr: n tai IFA: n kvalitatiivisen tutkimuksen. Analyysin tulos voi olla joko positiivinen tai negatiivinen, mikä molemmissa tapauksissa vaatii hoitoa.

    Decipheroidaan ketjureaktion positiivinen vaste seurauksena hepatiittiviruksen RNA-fragmenttien läsnäolosta tai infektion ilmiönä.

    Veriplasmassa tällä hetkellä virus viruttaa aktiivisesti ja parasiisi maksasolut. PCR-diagnostiikka voi antaa negatiivisen vasteen, jos virus-RNA: n hiukkaset ovat läsnä plasmassa vähän, alle testiherkkyyden tason tai olematta lainkaan. Suoran infektion jälkeen viruksen määrä kasvaa suhteellisen hitaasti, ja vain 1-2 viikon jälkeen ifa tai muu kvalitatiivinen tutkimus voi erottaa ne.

    Negatiivinen analyysi voidaan saada seuraavissa tapauksissa:

    1. Otettaessa materiaalia epätarkoituksenmukaisissa olosuhteissa saatetaan verinäyte saastuttamalla;
    2. Aiemmin potilaan hepariinin injektiot.
    3. Kun otetuissa näytteissä on muita entsyymejä ja substraatteja, jotka häiritsevät ketjureaktion kulkua.

    Kvantitatiivinen analyysi

    Kvantitatiivinen koe mikrobiologisena diagnoosina on suunniteltu viruksen kuormituksen määrittämiseen. Viremian vahvistettu kvalitatiivinen analyysi on perusta geneettisen materiaalin määrän määrittämiselle ja sen keskittymiselle. Tunnistetun viruksen RNA: n määrä määritetään veren tilavuuden yksikössä, tavallisesti 1 millilitraa. Vaaditut materiaalit ilmaistaan ​​kansainvälisissä yksiköissä, ja jotkin laboratoriot analysoivat IFA: n käyttämät kopiomäärät.

    Yleensä ennen minkään terapeuttisen hoidon aloittamista suoritetaan PCR: n kvantitatiivinen analyysi. Viral-RNA: t lasketaan tarpeeksi usein: yhden, neljän, kaksitoista ja kaksikymmentäneljän viikon kuluttua. 12. viikkoa pidetään ohjeellisena, koska tämän ajanjakson analyysin perusteella suoritetaan lääketieteellisten toimenpiteiden tehokkuuden dekoodaus.

    Kvantitatiivinen analyysi PCR: n tai IFA: n avulla tarkoittaa näytteiden ottamista suonesta.

    Tulosten tulkinta korkean viruskuorman aluksi alkaa 800 000 IU / ml. Tällainen positiivinen tulos hepatiitti C: lle heijastaa vähintään 3 000 000 kopiota yhden millilitran veressä. Viremian pieni taso pysähtyy 400 000 IU / ml: n arvolla. Tutkimuksen tulokset voivat olla arvot negatiivisena vasteena, samoin kuin "mittausalueen alapuolella".

    Kvantitatiivinen testi, jossa arvio "mittausalueen alapuolella" kertoo, että reaktio ei onnistunut laskemaan RNA: ta. Virus ei kierrä kehossa, kuten positiivinen kvalitatiivinen testi osoittaa. Ptsr: n tai IFA: n kvantitatiivisen analyysin negatiivinen indikaattori osoittaa RNA: n puuttumisen tässä verinäytteessä.

    Huolimatta rajoitetuista tapauksista viruksen siirtämiseen veren kautta, riski viruksen siirtämisestä sukujen salaisuuksien kautta äidiltä lapseen lisääntyy.

    Kvantitatiivinen analyysi tarjoaa merkittävää apua terapeuttisten toimenpiteiden arvioinnissa. Ifa ja ptsr heijastavat antiviraalisten lääkkeiden vaikutusta, auttavat määrittämään hoidon ajankohdan ja arvioimaan potilaiden immuniteetin muodostumista. Laboratoriokokeiden aikaisin negatiivinen vastaus osoittaa hoidon onnistumisen ja tarve lyhentää hoidon kestoa. Viremian hitaasti laskenut määrät voidaan tulkita tarve muuttaa terapeuttista kurssia. Virustason taso määrittelee taudin ennusteita. Hepatiitti, jolla on alhainen verenpaine, todennäköisesti yksinkertaisesti hoidetaan ja voi poistaa kokonaan viruksen elimistöstä. Suuri viruksen läsnäolo veressä vaatii tarkkaavaisuutta ja monipuolista hoitoa.

    Kvalitatiivinen analyysi hepatiitti C: lle

    Jätä vastaus

    Laadullinen analyysi polymeraasiketjureaktiosta - hepatiitti C: n PCR määrittää HCV: n läsnäolon tai puuttumisen elimistössä. Laboratoriossa tutkitaan RNA: n rakennetta, jossa virus sijaitsee. Jos virus C tunnistetaan, on välttämätöntä käydä hoitoa, koska laiminlyöty maksan toiminta aiheuttaa vakavia seurauksia. Laadullinen PCR suoritetaan talteenoton jälkeen vasta-aineiden puuttumisen varmistamiseksi. Nimetty ja ennaltaehkäisevä tutkimus. Koska veren patogeenipitoisuus on pieni, PCR (kvalitatiivinen) ei pysty havaitsemaan mitään, koska diagnoosijärjestelmällä on sen herkkyysrajat. Kun kyseessä on taudin alkuvaihe tai lievä muoto, PCR: n diagnoosiin viime kädessä ultraäänellä herkät laitteet.

    Mikä on RNA-virus?

    Hepatiitti C -viruksen (tai hepatiitti C -viruksen RNA) RNA-nimitystä kutsutaan itse maksasairaukseksi. Virus C sitoutuu terveen kehon soluun tunkeutumaan sisään. Ajan mittaan, levitä koko kehon, se on vain päästä veren. Tämän seurauksena taudinaiheuttaja tunkeutuu maksaan, sulaa solut ja toimii kovasti. Maksa-solut (hepatosyytit) toimivat sen vaikutuksen alaisina, muuttuvat parhaillaan ja tästä kuolevat. Mitä kauemmin virus C on maksassa, sitä enemmän soluja kuolee. Ajan myötä vaaralliset sairaudet johtavat pahanlaatuiseen rappeutumiseen ja kuolemaan.

    Maksan infektiota tämäntyyppisen viruksen kanssa ei voi ilmetä millään tavoin ulkoisesti. Monien vuosien tai kymmenien vuosien ajan tartunnan saanut henkilö kokee olevansa täysin terve ja vain satunnaistarkastus paljastaa useimmiten patologian. Kun luovutetaan verta hepatiitille, tutkitaan osaa ihmisen geenistä (DNA) kuuluvasta RNA: n (ribonukleiinihappo) ketjusta. Laboratoriotutkimuksen tuloksia ei tule käyttää itsekäsittelyyn, koska tämä on vain indikaattori. Lääkäri määrittää tarkan kuvan ja lisää diagnoosia.

    Kun valmis: todistus tutkimuksesta

    HCV: n vahvistamiseksi on osoitettu PCR-analyysi (polymeraasiketjureaktio). PCR-tutkimukset auttavat löytämään patogeenin materiaalin RNA-rakenteessa ja määrittämään tehokkaan hoidon. Nimitetty seuraavissa tapauksissa:

    • maksa-tulehduksen merkkien tunnistaminen;
    • ennaltaehkäisyn seulontatutkimukset;
    • ihmisten kosketukseen joutuvat henkilöt;
    • eri alkuperää olevan hepatiitin diagnosointi (tärkein taudinaiheuttajan määritelmä);
    • Viruksen lisääntymisen aktiivisuuden taso kroonisessa muodossa;
    • maksakirroosi;
    • määrittää määrätyn hoidon tehokkuus.
    Lääkärin määrää PCR-tutkimukset hepatiitin hoidon tehokkuuden määrittämiseksi.

    PCR: n laadullinen ja kvantitatiivinen analyysi on olemassa. Kvantitatiivinen PCR osoittaa RNA: n prosenttiosuuden viruksen kantajista veressä ja kvalitatiivinen PCR osoittaa viruksen läsnäolon tai poissaolon. Laadun positiivinen indikaattori (hepatiitti C-RNA) edellyttää myös kvantitatiivista tutkimusta. Hepatiitti C: n taudinaiheuttajan korkea pitoisuus liittyy siirron riskiin, toisin sanoen muiden saastumiseen. Pieniä määriä käsitellään paremmin. RNA-virusten määrä veressä ei liity taudin voimakkuuteen. PCR-analyysi suoritetaan myös interferonihoidon yhteydessä hoitokurssin keston ja monimutkaisuuden määrittämiseksi.

    Hepatiitti C: n kvalitatiivisen PCR-analyysin ominaisuudet

    Kvalitatiivinen analyysi polymeraasiketjureaktioreaktiolla osoitetaan kaikille potilaille, joilla on veren vasta-aineita hepatiitti C: hen. Kuka on toipunut ja toipunut, tulisi testata uudelleen. On suositeltavaa analysoida hepatiitti B: tä, sitten positiivisen lopputuloksen tapauksessa ja hepatiitti D: n suhteen. Myös kvalitatiivisesti analysoitu reaktio on suoritettava yhdessä muiden verikokeiden kanssa. Analysoinnissa esitetään täydellinen kuva virusten leviämisestä.

    Testituloksista nähdään vain positiivinen koe hepatiitti C: lle tai negatiivinen, toisin sanoen viruksen läsnäolo tai puuttuminen. Jos päätelmä on "havaittu", niin virus toimii ja toimii edelleen aktiivisesti. Nimitys "ei löydy" tarkoittaa viruksen puuttumista tai sen pienen määrän. Tämän indikaattorin avulla on otettava huomioon, että diagnoosijärjestelmien analyyttinen herkkyys on erilainen ja RNA-hepatiitti C voi olla edelleen veressä, mutta ei ilmeistä analyysissä.

    Erityisen herkkä PCR-ultra-hepatiitti C -menetelmä paljastaa jopa pieninä määrinä. Käytetään hybridisaatio-fluoresoivaa tutkimusta, joka on monta kertaa suurempi kuin tavanomaiset PCR-järjestelmät. Menetelmää käytetään useissa tapauksissa:

    • hepatiitti C: n epäiltyjä piileviä muotoja;
    • Patogee- nin ei vahvistanut PCR: n diagnoosia, mutta vasta-aineita;
    • takaisin perinnässä;
    • tunnistamaan infektion varhaisessa vaiheessa.
    Takaisin sisältöön

    Analyysin selitys

    Lopulliseen päätökseen diagnoosissa vaikuttaa HCV: n PCR-dekoodaukseen, erityisesti ultramethodin avulla. Tämän tutkimuksen tärkein haitta on se, että näytteen ja materiaalien steriilejä olosuhteita noudatetaan tiukasti. Pieni poikkeama osoittaa joskus epätarkkoja johtopäätöksiä analyytikoista, vaikeuttaa diagnoosia ja sen jälkeistä hoitoa. PCR: n analyysi hepatiittiviruksen RNA: n määrittämiseksi ei aina näytä taudin kuvaa luotettavasti, joskus epätarkkuudet hyväksytään molemmilla tavoilla.

    Hepatiitti-viruksen diagnosointi on suositeltavaa soveltaa kattavaa tutkimusta.

    Indikaattoreiden taso

    Jagm-vasta-aineiden puuttuminen RNA: lle viruksen hepatiitti C: ssä pidetään normaalina polymeraasiketjureaktion analyysissä. Samalla serologisen analyysin tulokset osoittavat, että vasta-aineet ovat läsnä viruksessa C ja tämä on myös normin rajoissa. Kvalitatiivinen määritelmä ei osoita taudin voimakkuutta, se vain paljastaa hepatiitti C: n aiheuttavan aineen RNA: ssa. Tällainen analyysi toistetaan hoidon jälkeen todellisen elpymisen varmistamiseksi.

    poikkeamat

    Jos JgM-vasta-aineita HCV-RNA: lle on läsnä, tämä ilmaisee kehittyvän infektion. Tauti on akuutti tai krooninen, ilmenee eri vaiheissa. Jos vasta-aineiden määrän väheneminen kirjataan, analyysi osoittaa hoidon tulosten saavuttamisen elpymisen aikana. On erittäin harvinaisia ​​tapauksia, joissa vääriä positiivisia löydöksiä diagnosoinnissa. Ne löytyvät naisista raskauden aikana ja ihmisillä, joilla on muita tartuntatauteja.

    Hepatiitti C: n PCR: n laadullinen ja kvantitatiivinen analyysi: negatiivinen, positiivinen, dekoodaus

    Hepatiitti C - viruksen aiheuttama maksasairaus HCV Flavivirus (alkaen Englanti hepatiitti C-virus.), Jossa rakenne sisältää molekyylin ribonukleiinihappo (RNA). RNA kantaa viruksen geneettisen koodin. Sen läsnäolo mahdollistaa hepatiitti C: n PCR-analyysin.

    HCV on vaaraksi ihmisille ja että ns serologista ikkuna (välinen aika infektio ja ulkonäkö reaktion immuunijärjestelmä) voi olla riittävän pitkä - muutamasta viikosta kuuteen kuukauteen.

    Tämä ei paljasta infektiota ja aloittaa hoidon ajoissa.

    Vastaanottavan kehon yksilöllisistä ominaisuuksista riippuen HCV voi ilmetä akuutissa muodossa ja saattaa myös kehittyä kroonisena sairaudena, joka vaatii pitkäaikaista ja kallista hoitoa. HCV-vasta-aineiden havaitsemiseksi suoritetaan joukko laboratoriokokeita, mukaan lukien hepatiitti C: n PCR. Tämä testi suoritetaan kaikille ihmisille, joiden veressä HCV-vasta-aineet löydettiin.

    Mikä on PCR-analyysi?

    Laboratorioanalyysi hepatiitti C: n PCR: lle - biologisen materiaalin tutkimus flavaviruksen läsnäolon tunnistamiseksi.

    Polymeraasiketjureaktion (niin puretaan lyhenne) esittää kvantitatiivinen arvo virus- leesion organismi, sen laatuominaisuuksien sekä genotyypin sisältävät RNA: ta.

    Niiden perusteella sekä lisäanalyysien perusteella määritetään hoitomenetelmä ja kesto sekä epidemiologinen tekijä (riski siirtää toiselle liikenteenharjoittajalle).

    Mikä on hepatiitti C: n RNA-analyysi?

    Hepatiitti C: n PCR: ta kutsutaan myös RNA-analyysiksi (HCV RNA), koska sitä ei tiedetä. Flavavirus sisältää RNA-partikkelin, jonka virion koko on 30-60 nm. Yksi tämän mikro-organismin ominaisuuksista on suuri mutaatioalttius.

    Jokaisella viruksen alalajilla (genotyypeillä) on erilainen vastustuskyky, joka aiheuttaa erilaiset hoitomenetelmät ja potilaan jatkoennusteen luonteen.

    Biologisen materiaalin (laskimoverta) käsitellään paasto ja yleensä testattu Real-Time PCR (erittäin herkkä reaaliaikainen diagnostiikka määrittää alaraja 15 IU / ml käyttämällä automaattista suljetun järjestelmän tila).

    Muita testejä on esimerkiksi COBAS AMPLICOR, jonka herkkyys on 50-100 IU / ml. Kaikissa laboratoriotutkimuksissa herkkyyskynnys on tärkeä, ts. reagenssin kyky havaita viruksen minimikonsentraatio biologisessa materiaalissa.

    Analyysityypit hepatiitti C: lle käyttäen PCR-menetelmää

    Hepatiitti C: n PCR sisältää kolme tärkeää osaa:

    • laadullinen analyysi;
    • kvantitatiivinen analyysi;
    • genotyypitys.

    Nämä testit voivat määrittää viremian luonteen sekä taudinaiheuttajan geneettiset oireet. Diagnostiikkajärjestelmän herkkyydestä riippuen testi suoritetaan kerran, ja joskus toista testiä herkemmällä reagenssilla tehdään tulosten vahvistamiseksi tai tarkentamiseksi.

    Korkealaatuinen hepatiitti C PCR

    PCR-analyysi hepatiitti C: n laadulle on toinen yleinen nimi polymeraasiketjureaktiomääritykselle. Testin standardi herkkyys, joka mahdollistaa viruksen vaurion läsnäolon, on välillä 10-500 IU / ml.

    Hepatiitti C: n PCR: n negatiivinen analyysi osoittaa, että viruksen pitoisuus potilaan veressä on pienempi kuin diagnoosijärjestelmän herkkyys.

    Jos kvalitatiivinen PCR antoi "ei havaittu" vastausta, myöhempää hoitoa varten on tärkeää tietää reagenssin herkkyysraja.

    Proteiinifraktiot flavavirukseen vaikuttavat paljon myöhemmin.

    Quantitative Hepatitis C PCR

    PCR-hepatiitti C: n kvantitatiivinen on viruksen kuormituksen indikaattori, joka heijastaa flavaviruksen RNA-pitoisuuden tasoa kehossa. Tämä on indikaattori, joka osoittaa, kuinka monta viruksen RNA-fragmenttia on yksi kuutiosenttimetri verta. PCR-hepatiitti C-RNA: n kvantitatiivinen testitulokset tavanomaisessa järjestelmässä on ilmoitettu kansainvälisinä yksikköinä ml: aa kohti (IU / ml) ja voidaan tallentaa eri tavoin, esimerkiksi - 1,7 ppm tai 1700000 IU / ml.

    Hepatiitti C: n kvantitatiivinen PCR-diagnoosi annetaan potilaille ennen antiviraalisen hoidon aloittamista ja hoidon viikolla 12 HCV: n valittujen menetelmien tulosten arvioimiseksi. Viruslaskun avulla voit tunnistaa kolme taudin tärkeätä indikaattoria:

    • infektiivisyys, so. riski lähetyksen väliaineesta toiseen (korkeampi pitoisuus flavavirusa RNA, sitä todennäköisemmin tartuttaa toiselle henkilölle, esim., yhdynnän aikana);
    • hoitomenetelmä ja tehokkuus;
    • kestosta ja ennusteesta (mitä korkeampi viruskuorma, sitä kauemmin hoito kestää).

    Hepatiitti C: n kvantitatiivinen PCR-diagnoosi riippuu laboratoriotestityypistä ja sen herkkyydestä. Normin alarajan katsotaan yleensä olevan 600 000 IU / ml, keskimääräinen arvo on välillä 600.000-700.000 IU / ml. Tuloksia 800 000 IU / ml tai enemmän pidetään RNA: ta sisältävien virusten suurina määrinä.

    genotyypitys

    Koska HCV: n korkea mutaatioaktiivisuus on luonteeltaan tärkeää, on määritettävä testausvaiheessa, minkä viruksen genotyyppi on potilaan veressä. Yhteensä 11 hepatiitti C -viruksen genotyyppiä on kirjattu planeetalle, johon kuuluu monia alalajia. Venäjän federaation alueella 1,2 ja 3 ovat yleisiä.

    Hepatiitti C: n PCR-RNA yhdessä genotyyppien kanssa on erittäin tärkeä analyysin osa, koska antaa lääkärille mahdollisuuden määrittää viruksen vastustuskyky (resistenssi), valita sopivia lääkkeitä ja määrätä hoidon.

    Genotyyppaus mahdollistaa myös epäsuoran määrityksen maksan tilasta. Esimerkiksi HCV: n 3 genotyyppiin liittyy usein steatosis, jossa rasva kerääntyy kehon soluihin.

    PCR: n veritesti hepatiitti C: ssä tulee antaa luku, joka määrittää genotyypin. Laboratorion vastauksissa se voidaan kirjoittaa "ei kirjoitettu" - ja tämä tarkoittaa, että ihmisveressä on virus, jota testausjärjestelmä ei määrää. Tämä voi osoittaa, että genotyyppi ei ole tyypillistä tietylle maantieteelliselle alueelle. Tässä tapauksessa on välttämätöntä siirtää analyysi uudelleen diagnoosijärjestelmän suuremmalle herkkyydelle.

    PCR-analyysin dekoodaus hepatiitti C: lle

    Hepatiitti C: n PCR: n testi voidaan ilmaista edellä mainittujen tietojen perusteella. Laboratoriotestien tulosten vastaanotossa yleensä kirjoitetaan seuraavat tiedot:

    • "Löydetty" / "ei löytynyt" (korkealaatuinen PCR hepatiitti C: lle);
    • RNA: ta sisältävien fraktioiden määrä, esimerkiksi 831,680 IU / ml (kvantitatiivinen PCR-määritys);
    • luku, joka määrittää HCV-genotyypin, esimerkiksi - 1, 2, 3, 4;
    • testin nimi on useimmiten reaaliaikaista.

    Tärkein hepatiitti C: n PCR-analyysin tulkitsemiseksi on toinen kohde, joka osoittaa viruksen kuormituksen määrittävän ennusteen, hoidon menetelmän ja keston.

    Jos hepatiitti C: n PCR-analyysi on negatiivinen ja ELISA-positiivinen - mitä se tarkoittaa?

    Laboratoriotutkimusten tulkitsemiseksi on tärkeää ottaa yhteyttä hepato- tai infektiosairauden asiantuntijaan, joka selittää saadut tiedot diagnostisen järjestelmän tyypin ja sen herkkyyden kynnyksen mukaisesti. Lääketieteellisessä käytössä on monia verikokeita, jotka voivat johtaa henkilöä, jolla ei ole lääketieteellistä koulutusta, sekaannusta.

    Esimerkiksi, jos testi HCV PCR-negatiivinen ja positiivinen ELISA, se voi osoittaa, että tällä kertaa potilaan veressä ei ole HCV, mutta ennen kuin hän sai akuutin muodossa hepatiitti C: Katsotaan, että positiivinen immunosorbenttimääritys (ELISA), ilmenee, että veressä on vasta-aineita, jotka on tuotettu viruksen hyökkäyksen jälkeen aiemmin. Nykyaikaisessa lääketieteellisessä käytännössä ELISA-analyysi ei kuitenkaan ole riittävän luotettava ja usein antaa epätyypillisiä tuloksia, joten lääkärit käyttävät sitä ensisijaisena seulonnanaan. Taudin diagnosoinnin yhteydessä asiantuntijat ohjataan tarkasti PCR-testeillä.

    Hyödyllinen video

    Seuraavassa videossa on hyvin yksityiskohtaista ja mielenkiintoista kertoa, mitä PCR-menetelmän ydin on, miten analyysi tehdään:

    johtopäätös

    Laskimoverta otetaan tavallisesti hepatiitti C: n PCR: n analyysiin. Useimmiten biologinen materiaali - ELISA: ta ja suoraan PCR-testiä varten on kaksinkertainen näytteenotto. Oikeat testitulokset edellyttävät biologisten materiaalien laboratoriotutkimuksen tärkeimpien sääntöjen noudattamista:

    • veri analysoitavaksi annetaan aamulla tyhjälle vatsalle;
    • syömisen ja veren ottamisen tulisi kestää vähintään 8 tuntia;
    • Ennen testin suorittamista sinun on myös suljettava pois alkoholia ja paistettuja ruokia;
    • Päivää ennen verta, sinun on vältettävä suurta fyysistä rasitusta.

    Verikokeiden tulokset ovat yleensä valmiita seuraavana päivänä.


    Aiheeseen Liittyviä Artikkeleita Hepatiitti